春節假期將至，對于科研人來說這可是又愛又恨：一個假期回來，原本生龍活虎的細胞瞬間“暴斃”。
那么導致這種情況的原因有哪些？
節前養細胞過程該注意什么？
NEST幫你劃重點！
幫細胞崽崽過龍年！
01細胞前期準備
細胞培養體系中最為重要的即為細胞培養基。常見的細胞培養方法便是90%基礎培養基（DMEM、1640、F12等）+10%胎牛血清。
盡管使用廣泛，但胎牛血清在細胞培養中面臨著諸多問題和風險。有研究發現培養基支原體污染中的牛萊氏無膽甾原體和精氨酸支原體來源于牛血清。
因此，胎牛血清的品質至關重要。
NEST選用南美烏拉圭血源，每一批血清的生產都受到嚴格的控制，從血清的收集和整個處理和生產的所有階段，按照符合歐洲法規進行處理，一直到最終包裝做到全程的質量控制。
NEST胎牛血清血源地證明
NEST胎牛血清無疫病證明
NEST胎牛血清官方原產地證明
此外，NEST每一批血清都會進行完善的檢測。
1. 支原體：每產品批次都要檢測有無支原體。通過培養方法檢測血清是否存在支原體。
2. 無菌性：產品均基于歐洲藥典或美國藥典進行無菌性檢測，確保無細菌、酵母、大腸桿菌噬菌體等。無菌過濾、無菌分裝，每生產批次中均會抽樣進行無菌測試。
3. 血紅蛋白：血紅蛋白具有氧化性，過高會導致細胞受損。采用分光光度計測量殘留血紅蛋白水平。
4. 細胞培養試驗：每批胎牛血清都被測試特定細胞系的體外培養效果。從細胞生長、鋪板效率、克隆效率三方面評判。測試細胞種類：HeLa，L929，SP2/0-AG14，MRC-5
選用指南
02細胞凍存操作
細胞凍存是將細胞放在低溫環境，減少細胞代謝，以便長期儲存的一種技術。
凍存管一般用作低溫儲存，是常用的實驗耗材，多用于生物、醫藥、食品等行業。采用醫用聚丙烯(PP)為原料，在液氮氣相的超低溫環境下,可耐低溫至零下196℃。
耐思凍存管分常規無碼凍存管、二維碼凍存管和三碼合一SBS凍存管三種系列，具備完整的穩定性與安全性驗證報告。
細胞在不加任何保護劑的情況下冷凍，細胞內外的水分會很快形成冰晶從而引發一系列的不良反應。
因此，細胞凍存液至關重要。
NEST細胞凍存液改良優勢
選用指南
細胞凍存操作指南（排版的時候使用上下滑動查看文字的模板）
1. 貼壁細胞制備細胞懸液：(懸浮細胞請忽略此步驟)
(1) 將舊培養基吸除,用PBS清洗兩遍。
(2) 在培養瓶中加入少許胰酶,以能覆滿瓶底為限。將培養瓶平置于培養箱中消化約1~2分鐘,期間在顯微鏡下觀察,一旦發現細胞間隙增大、細胞變圓、比較松動后,立即終止消化(個別難消化細胞需要延長消化時間,但要避免消化過度)。
(3) 加入適量溫浴好的完全培養基終止消化,輕輕吹打均勻細胞。
2. 貼壁細胞和懸浮細胞的凍存：
(1) 取少量細胞懸液細胞計數,算出細胞總數和所需細胞凍存液的量。細胞的凍存密度以1×10^6~2×10^7 cells/ mL為宜。
(2) 將所需量的細胞懸液轉移至適當離心管中,200~500×g,離心3-5分鐘, 棄上清收集細胞。（離心速度和時間取決于細胞類型）
(3) 向細胞沉淀中加入適量無血清非程序細胞凍存液,用移液器輕輕吹打以重懸細胞,分裝于無菌細胞凍存管中,嚴密封口后,注明細胞名稱、代數、日期。
(4) 直接置于-80℃冰箱中儲存,細胞可至少保存一年;或者-80℃過夜后,次日將細胞投入液氮中長期儲存。
03細胞復蘇操作
1. 自液氮罐或-80℃冰箱中取出凍存管,檢查蓋子是否旋緊,立即放入37℃水浴中快速解凍。(避免冰晶重新結晶而造成細胞死亡),輕搖凍存管使其在1~2分鐘內全部融化,以75%酒精擦拭凍存管外部,移入無菌操作臺內。
2. 將解凍的細胞懸液移至15mL無菌離心管中,再加入5~10mL預熱好的完全培養基,輕輕混合均勻,200~500×g,離心3-5分鐘,棄上清收集細胞。(離心速度和時間取決于細胞類型)
3. 加入預熱好的完全培養基,混合均勻,轉移到細胞培養皿或培養瓶中,置于細胞培養箱中培養。
注：可使用耐思新推出細胞復蘇儀替代原始細胞復蘇過程，預熱1分鐘，催融階段1分10秒左右，解凍復蘇階段大約1分20秒左右，解凍復蘇后細胞存活率高。
